style="width:6.47332in;height:2.17316in" /> 本文是学习GB-T 11446.10-2013 电子级水中细菌总数的滤膜培养测试方法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
GB/T 11446 的本部分规定了电子级水中细菌总数(活菌)的滤膜培养测试方法。
本部分适用于 EW-I～EW-IV 级电子级水中细菌总数的测定。
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GB/T 11446.1—2013 电子级水
GB/T 11446.3—2013 电子级水测试方法通则
GB/T 11446.3—2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
菌落 bacterium colony
将单个菌体或孢子在固体培养基上培养一定时间后，使其生长繁殖形成肉眼可见的微生物团，即为
菌落。
3.2
细菌培养法 bacterium culture method
将一定量水样经超滤膜过滤，再用适当的培养基将留在超滤膜表面的细菌培养以形成菌落，然后计
数以测量水中活细菌的数量。
3.3
细菌总数 total bacterial count
单位体积样品中存在的有生存能力的微生物总数，不包括厌氧有机体。
3.4
培养基 medium
是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，
一般都含有碳水化合物、含氮物
质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。
水中的细菌经过0.45 μm 微孔膜过滤截留于滤膜上，将滤膜贴在衬底(吸透了TGY
培养基的滤
纸)上，在适宜的条件下进行培养，细菌繁殖成肉眼可见的菌落。细菌体内存在的脱氢酶，与2,3,5-三
苯基氯化四氮唑(简称 T.T.C)
在胞内反应使菌体呈红色，反差增大，借此观测及计数。
GB/T 11446.10—2013
5.1 外来微生物的污染影响分析结果，细菌分析时应特别注意。
5.2
将载菌膜置于培养基上时，中间如有间隙或气泡影响分析结果的现象应严格避免。
6.1 空白用水：GB/T 11446. 1—2013 规定的 EW-I
级电子级水于高压灭菌器内在1 .4×10⁵ Pa 压力 下，灭菌15 min。
6.2 TGY 培养基：1L 空白用水中加入10 . 0 g 胰 蛋 白 胨(B.R)、6.0 g 牛 肉
膏(B.R) 和2.0 g 葡 萄 糖 (A.R), 加热溶解，冷却至室温，以1mol/L
氢氧化钠调节pH 至7.4～7.6,再加15.0g 琼脂，加热溶解并
趁热过滤(以四层纱布、 一层脱脂棉为介质),装于300 mL
三角瓶中，灭菌后备用。
注：在制备培养基的加热过程中，需补充所损失的水分。
6.3 1 mol/L氢氧化钠溶液：20g 氢氧化钠(A.R) 溶于500 mL
空白用水并储于聚乙烯瓶中。
6.4 T.T.C 溶液1.0 g/L 灭菌备用。
7.1 无菌室(或无菌工作台):备有功率大于或等于2 W/m²
的紫外灯，置于工作台上距离工作台面1.5 m 处。
7.2 电热恒温培养箱：(20℃~60℃)±1℃。
7.6 微孔有机滤膜：φ50 mm, 孔径0.45 μm 格栅膜。
7.7 过滤器：φ50 mm 杯式不锈钢过滤器。
7.8 各种玻璃器皿：广口瓶、三角瓶、培养皿、量筒等。
7.9 酒精灯、平头镊子、纱布、棉花、定性滤纸等。
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说明：
1——滤杯；
2——滤膜；
4——抽滤瓶；
5——缓冲瓶；
6——真空泵。
图 1 抽滤系统示意图
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GB/T 11446. 10—2013
8.1.1 开启无菌室或无菌工作台1 h～2h 后，使之进入稳定工作状态。
8.1.2 器皿的灭菌：将培养皿、取样瓶等玻璃器皿，先用电子级水 EW-I
级水洗净、烘干，用纸包严后置
于铝制专用容器中放入恒温箱(160℃~165℃)内，干热灭菌2 h。
8.1.3 有机滤膜的灭菌：于电子级水中煮沸15 min,
弃去沸水后，再加新的水煮沸，反复进行3次即可。
或在紫外灯下照1 h～2h 灭菌。
注：灭菌时注意安全。
取2.0 mLT.T.C 溶液滴于100 mL
温度为46℃±1℃的培养基中，在培养皿中混匀(约3 mm~
4 mm厚),冷却备用。取摇匀后的适量水样：EW-I～EW-Ⅲ 级水取20 mL～100
mL,EW-IV 级 水 取 1mL, 经过过滤装置过滤，用50 mL
空白用水冲洗，抽干。用镊子将滤膜置于备好的培养基上，膜面朝
上，盖好皿盖；待凝固后，将平皿翻转置于培养箱中，于37℃±1℃下恒温培养48 h
后取出，在体视显
微镜下观察菌落并计数。按同样步骤进行空白试验。每个样品平行进行3次测定，取其平均值。
水中的细菌总数按式(1)计算：
style="width:1.37336in;height:0.5467in" /> …………………… (1)
式 中 ：
A— 每毫升水样中细菌总数，单位为个每毫升(个/mL);
n ——滤膜上的菌落数，单位为个；
no—— 空白试验的菌落数，单位为个；
V— 被测水样的体积，单位为毫升(mL)。
测试报告应按 GB/T 114463—2013 给定格式进行编制。
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中 华 人 民 共 和 国
国 家 标 准
电子级水中细菌总数的
滤膜培养测试方法
GB/T 11446.10—2013
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2014年4月第一版
关
书号：155066 ·1-48658
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